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上海一研生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第11年

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細(xì)胞培養(yǎng)常用試劑

時(shí)間：2016/1/8閱讀：1583
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(一)pH調(diào)整液

    合成培養(yǎng)液大多呈弱酸性，而細(xì)胞生長(zhǎng)的zui適pH值為7．0～7．2，因此使用培養(yǎng)液時(shí)要調(diào)整pH，并注意培養(yǎng)過(guò)程中pH的變化，及時(shí)換液。常用的pH調(diào)整液包括NaHCO3溶液和Hepes緩沖液。

1.NaHCO3溶液NaHCO3是培養(yǎng)基中必須添加的成分，一般情況下按照說(shuō)明書(shū)要求添加，以保證培養(yǎng)基在5％CO2的環(huán)境中pH達(dá)到設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)。通常情況下，培養(yǎng)液添加血清后可能偏酸，可臨時(shí)用NaHCO3溶液調(diào)節(jié)其pH值。常用的NaHC3溶液濃度為7．4％、5．6％、3．7％三種。調(diào)節(jié)pH時(shí)，NaHCO3溶液要逐滴加入，并不時(shí)搖動(dòng)培養(yǎng)液，以防止加入過(guò)量。若pH過(guò)高時(shí)，可用高壓滅菌10％醋酸溶液或通人CO2氣體調(diào)節(jié)。配制時(shí)用三蒸水溶解后，過(guò)濾除菌，分裝備用。亦可使用高壓蒸氣滅菌，密封，4℃冰箱保存。

2．Hepes緩沖液是一種可以保持細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中pH值較長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定的氫離子緩沖劑。一般在克隆化培養(yǎng)時(shí)要添加H印es緩沖液。通常使用濃度為10～15mmol／L。配制時(shí)，稱取所需的Hepes，用培養(yǎng)液溶解后，用1mmol／L NaOH調(diào)節(jié)pH到7．O，過(guò)濾除菌分裝后備用。

(二)抗生素液

    細(xì)胞培養(yǎng)中經(jīng)常使用的抗生素是青，俗稱“雙抗溶液”，可以預(yù)防絕大多數(shù)的細(xì)菌污染。使用的終濃度為100U／ml，為100μg／ml。常用Hanks或PBS配制為100倍濃縮液．分裝凍存，使用前經(jīng)稀釋后加入到培養(yǎng)液中。

(三)補(bǔ)充液

    在細(xì)胞代謝過(guò)程中起重要作用，合成培養(yǎng)基中都要添加。易降解，應(yīng)在使用前添加。常配制100倍濃度的濃縮液，濃度為200mmol／L。使用時(shí)，每lOOml培養(yǎng)液中加入0．5～2ml濃縮液，終濃度為1～4mmol／L。

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