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上海一研生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第11年

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細(xì)胞培養(yǎng)常用試劑

時(shí)間:2016/1/8閱讀:1583
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(一)pH調(diào)整液

    合成培養(yǎng)液大多呈弱酸性,而細(xì)胞生長(zhǎng)的zui適pH值為7.0~7.2,因此使用培養(yǎng)液時(shí)要調(diào)整pH,并注意培養(yǎng)過(guò)程中pH的變化,及時(shí)換液。常用的pH調(diào)整液包括NaHCO3溶液和Hepes緩沖液。

1.NaHCO3溶液NaHCO3是培養(yǎng)基中必須添加的成分,一般情況下按照說(shuō)明書(shū)要求添加,以保證培養(yǎng)基在5%CO2的環(huán)境中pH達(dá)到設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)。通常情況下,培養(yǎng)液添加血清后可能偏酸,可臨時(shí)用NaHCO3溶液調(diào)節(jié)其pH值。常用的NaHC3溶液濃度為7.4%、5.6%、3.7%三種。調(diào)節(jié)pH時(shí),NaHCO3溶液要逐滴加入,并不時(shí)搖動(dòng)培養(yǎng)液,以防止加入過(guò)量。若pH過(guò)高時(shí),可用高壓滅菌10%醋酸溶液或通人CO2氣體調(diào)節(jié)。配制時(shí)用三蒸水溶解后,過(guò)濾除菌,分裝備用。亦可使用高壓蒸氣滅菌,密封,4℃冰箱保存。

2.Hepes緩沖液是一種可以保持細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中pH值較長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定的氫離子緩沖劑。一般在克隆化培養(yǎng)時(shí)要添加H印es緩沖液。通常使用濃度為10~15mmol/L。配制時(shí),稱取所需的Hepes,用培養(yǎng)液溶解后,用1mmol/L NaOH調(diào)節(jié)pH到7.O,過(guò)濾除菌分裝后備用。

(二)抗生素液

    細(xì)胞培養(yǎng)中經(jīng)常使用的抗生素是青,俗稱“雙抗溶液”,可以預(yù)防絕大多數(shù)的細(xì)菌污染。使用的終濃度為100U/ml,為100μg/ml。常用Hanks或PBS配制為100倍濃縮液.分裝凍存,使用前經(jīng)稀釋后加入到培養(yǎng)液中。

(三)補(bǔ)充液

    在細(xì)胞代謝過(guò)程中起重要作用,合成培養(yǎng)基中都要添加。易降解,應(yīng)在使用前添加。常配制100倍濃度的濃縮液,濃度為200mmol/L。使用時(shí),每lOOml培養(yǎng)液中加入0.5~2ml濃縮液,終濃度為1~4mmol/L。

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