小液流法測(cè)定植物組織水勢(shì)技術(shù)分析

一、 原理

TSZ Elisa試劑盒將植物組織分別放在一系列濃度遞增的溶液中，當(dāng)找到某一濃度的溶液與植物組織之間水分保持動(dòng)態(tài)平衡時(shí)，則可認(rèn)為此植物組織的水勢(shì)等于該溶液的水勢(shì)。因溶液的濃度是已知的，可以根據(jù)公式算出其滲透壓，取其負(fù)值，為溶液的滲透勢(shì)(ψπ)，即代表植物的水勢(shì)(ψw)(waterpotential)。

ψw=ψπ=-P=-CRT(大氣壓)

二、材料、儀器設(shè)備及試劑

(一)材料：小白菜、菠菜、油菜或其它作物葉片

(二)儀器設(shè)備：.帶塞小瓶2個(gè);2.帶有橡皮管的注射針頭;3.鑷子;4.打孔器5.培養(yǎng)皿。

(三)試劑：.0.05、0.0、0.5、0.20、0.25、0.30mol/L蔗糖溶液;2.甲烯藍(lán)粉末。

三、實(shí)驗(yàn)步驟

(一)取干燥潔凈的瓶6個(gè)為甲組，各瓶中分別加入0.05～0.30mol/L蔗糖溶液約4ml(約為瓶的2/3處)，另取6個(gè)干燥潔凈的瓶為乙組，各瓶中分別加入0.05～0.30mol/L蔗糖溶液ml和微量甲烯藍(lán)粉末著色，上述各瓶加標(biāo)簽注明濃度。

(二)取待測(cè)樣品的功能葉數(shù)片，TSZ Elisa試劑盒用打孔器打取小圓片約50片，放至培養(yǎng)皿中，混合均勻。用鑷子分別夾入5～8個(gè)小圓片到盛有不同濃度的甲烯藍(lán)蔗糖溶液的瓶中(乙組)。蓋上瓶塞，并使葉圓片全部浸沒(méi)于溶液中。放置約30～60min，為加速水分平衡，應(yīng)經(jīng)常搖動(dòng)小瓶。

(三)經(jīng)一定時(shí)間后，用注射針頭吸取乙組各瓶藍(lán)色糖液少許，將針頭插入對(duì)應(yīng)濃度甲組瓶溶液中部，小心地放出少量液流，觀察藍(lán)色液流的升降動(dòng)向。(每次測(cè)定均要用待測(cè)濃度的甲烯藍(lán)蔗糖溶液清洗幾次注射針頭)。如此方法檢查各瓶中液流的升降動(dòng)向。若液流上升，說(shuō)明浸過(guò)小圓片的蔗糖溶液濃度變小(即植物組織失水);表明葉片組織的水勢(shì)高于該濃度糖溶液的滲透勢(shì);如果藍(lán)色液流下降則說(shuō)明葉片組織的水勢(shì)低于該糖溶液的滲透勢(shì)，若藍(lán)色液流靜止不動(dòng)，則說(shuō)明葉片組織的水勢(shì)等于該糖溶液的滲透勢(shì)，此糖溶液的濃度即為葉片組織的等滲濃度

四、結(jié)果計(jì)算

將求得的等滲濃度值代入如下公式：

ψw=ψπ=-CRTi×.03×0.。式中：ψw=植物組織的水勢(shì)(單位：Mpa)ψπ=溶液的滲透勢(shì)C=等滲濃度(mol/L)R=氣體常數(shù)(0.00834MPa/L/mol/K)T=溫度i=解離系數(shù)(蔗糖=，CaCl2=2.60)大氣壓=.03=0.MPa。

【注意事項(xiàng)】

.TSZ Elisa試劑盒所取材料在植株上的部位要一致，打取葉圓片要避開(kāi)主脈和傷口。

2.2取材以及打取葉圓片的過(guò)程操作要迅速，以免失水。

3.3帶有結(jié)晶水的甲烯藍(lán)不易溶于CaCl2溶液，可在00℃下烘干成無(wú)水甲烯藍(lán)粉末使用。