ELISA試劑盒中的酶標(biāo)用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法:
1.包被用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為110μgml。
在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml4℃過夜。次日棄去孔內(nèi)溶液用洗滌緩沖液洗3次每次3分鐘。（簡(jiǎn)稱洗滌下同）。
2.加樣加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔）。
3.加酶標(biāo)抗體于各反應(yīng)孔中加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃孵育0.51小時(shí)洗滌。
4.加底物液顯色于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml37℃1030分鐘。
5.終止反應(yīng)于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.結(jié)果判定
可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果，反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)；陰性反應(yīng)為無色或極淺。
依據(jù)ELISA試劑盒檢測(cè)所呈顏色的深淺以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)O·D值在ELX808酶標(biāo)儀上于450nm（若以ABTS顯色則410nm）處以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O·D值若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍即為陽性。