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上海通蔚生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第16年

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元旦ELISA試劑盒操作步驟進(jìn)行測(cè)定

時(shí)間:2015/1/4閱讀:1765
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因此有些廠(chǎng)家為了保持較好的本底采用了單片段基因工程抗原及合成肽包被,該類(lèi)試劑盒的流行病學(xué)敏感度不夠,穩(wěn)定性也成問(wèn)題。也有廠(chǎng)家堅(jiān)持試劑盒高的流行病學(xué)敏感度,科學(xué)地對(duì)待反應(yīng)結(jié)果。ELISA試劑盒基因工程抗原是抗原基因在質(zhì)粒載體中原核或真核表達(dá)的蛋白質(zhì)抗原,多以大腸桿菌或酵母菌為表達(dá)系統(tǒng)。

該類(lèi)抗原與合成肽相比具有以下特點(diǎn):分子量大。合成肽采用化學(xué)方法制備,由于工藝的局限,合成數(shù)量有限,只能達(dá)到數(shù)百個(gè)氨基酸;而利用基因工程制備的抗原,分子量更大。良好的ELISA試劑盒板應(yīng)該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間和同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA試劑盒板由于配料的不同和制作工藝的差別,各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大。因此每一批號(hào)的聚苯乙烯制品在使用前須檢查其性能。

常用的檢查方法為:以一定濃度的人IgG(一般為10ng/ml)包被ELISA試劑盒板各孔后,每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀釋的酶標(biāo)抗人IgG抗體,保溫后洗滌,加底物顯色,終止酶反應(yīng)后分別測(cè)每孔溶液的吸光度??刂品磻?yīng)條件,使各讀數(shù)在0.8左右。計(jì)算所有讀數(shù)的平均值。所有單個(gè)讀數(shù)與平均讀數(shù)之差應(yīng)小于10%.與聚苯乙烯類(lèi)似的塑料為聚氯乙烯。作為ELISA試劑盒固相載體,聚氯乙烯板的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄,可切割,價(jià)廉、但光潔度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值有時(shí)也略高。

為比較不同固相在某一ELISA試劑盒測(cè)定中的優(yōu)劣,可用以下方法加以檢驗(yàn):用其他免疫學(xué)測(cè)定方法選出一個(gè)典型的陽(yáng)性標(biāo)本和一個(gè)典型的陰性標(biāo)本。將它們分別進(jìn)行一系列稀釋后,在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA試劑盒,然后比較測(cè)定結(jié)果。在哪一種載體上陽(yáng)性結(jié)果與陰性結(jié)果判別zui大,這種載體就是這一ELISA試劑盒測(cè)定的zui合適的固相載體。

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