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多肽的溶解方法

閱讀:605發(fā)布時間:2013-12-30

■多肽溶解的主要問題是二級結構的形成。雖然疏水肽鏈二級結構的形成更明顯,但除zui短的肽鏈外,此現(xiàn)象產(chǎn)生在幾乎所有肽鏈,與極性無關。所以,溶解多肽的*個原則是使用無菌蒸餾水或去離子水,當然無氧水。多肽溶液可能遇到細菌降解,為防止此情況的發(fā)生,應溶解在無菌的蒸餾水中或用0.450.2孔徑的濾膜過濾除菌。含有Cys、Met、Trp的多肽很容易氧化,應溶于無氧的水中,無氧水可通過注入惰性氣體(氮、氦、氬)減壓除氣得到;

■若多肽不溶于純水,超聲處理有助于打碎顆粒并增加溶解度。注意:超聲處理會引起溶液發(fā)熱或多肽降解;

■若多肽含有多個堿性氨基酸,使用(1-10%)的乙酸水溶液:對于疏水性強的多肽,應使用50%的乙酸;

■若多肽中含有大量酸性氨基酸,可用氨溶液(1-10%)或乙酸乙基*或重碳酸鹽等揮發(fā)性的堿性緩沖液溶解。pH值在層析前必須調整;

■異丙醇和乙腈能溶解中等大小的多肽。若肽要上柱,有機溶劑的量必須很少否則將嚴重影響停留時間;

■若多肽因含有Val、Leu、MetPhe、Tyr、Ala等芳香鏈而高度疏水、或為中性肽時,DMFDMSO等膜變性劑的使用,有利于多肽的溶解:

1.高濃度模變性劑通過破壞多肽的二級結構而助溶;

2.膜變性劑適于多肽分析液的制備,但可能會對其生物活性的研究工作造成干擾;

3.DMF是*變性劑(zui高濃度可達30%),滴加至多肽溶解;

4.反相層析法時,DMF將與洗脫液前鋒一起流出,根據(jù)入量的多少,峰值可能很高。大多數(shù)肽能在大量DMF流出后幾分鐘內流出,若肽鏈很小,洗脫太早,多肽的量將很低。


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