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人血小板活化因子(PAF)ELISA試劑盒操作步驟說明

閱讀:736發(fā)布時間:2011-05-11

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人血小板活化因子(PAF)ELISA試劑盒操作步驟

1. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。

為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加*標記抗體工作液 100μl(取1μl*標記抗體加99μl*標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),37℃,60分鐘。

3. 溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,200μl/每孔,甩干。

4. 每孔加辣根過氧化物標記親和素工作液(同*標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。

5. 溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,200μl/每孔,甩干。

6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔顯色不明顯,即可終止)。

7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8. 用聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。

 

人血小板活化因子(PAF)ELISA試劑盒說明

1.試劑盒保存:-20℃(較長時間不用時);2-8℃(頻繁使用時)。

2.濃洗滌液低溫保存會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。

3.中、英文說明書可能會有不一致之處,請以英文說明書為準。

4.剛開啟的聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質,此為正?,F(xiàn)象,不會對實驗結果造成任何影響。

 

 


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