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駱駝脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA試劑盒

時(shí)間:2017/3/6閱讀:263
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駱駝脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA試劑盒試劑的準(zhǔn)備:
1. 標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋?xiě)?yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:
500pg/ml(6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)  原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
250pg/ml(5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)  100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
125pg/ml(4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)  100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
62.5pg/ml(3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)  100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
31.2pg/ml(2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)  100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
15.6pg/ml(1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)  100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0pg/ml   (空白對(duì)照)   原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。 
駱駝脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA試劑盒試劑盒性能: 
1. 靈敏度:zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
操作步驟:
1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2. 根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3. 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。
4. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5. 每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育5分鐘。避免光照。
8. 取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
9. 在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
駱駝脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA試劑盒結(jié)果判斷與分析:
1、 儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、 以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的LTB4標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的LTB4含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度,再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。

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