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牛干細胞因子(SCF) ELISA試劑盒

時間:2017/5/15閱讀:267
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試劑的準備:
1. 標準品:標準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:
500pg/ml(6號標準品)  原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
250pg/ml(5號標準品)  100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
125pg/ml(4號標準品)  100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
62.5pg/ml(3號標準品)  100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
31.2pg/ml(2號標準品)  100ul的3號標準品

牛干細胞因子(SCF) ELISA試劑盒操作步驟:
1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。
4. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5. 每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育5分鐘。避免光照。
8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。加入100ul的標準品稀釋液
15.6pg/ml(1號標準品)  100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0pg/ml   (空白對照)   原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

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