［產(chǎn)品名稱］大鼠誘導型NO合酶（iNOS）ELISA檢測試劑盒

［英文名稱］Rat inducible nitric oxide synthase ELISA Kit
［貨號］ZK-R3047
［試劑盒］保存條件、保質(zhì)期2-8℃低溫保存下，6個月的保質(zhì)期。
［運輸方式］當?shù)乜蛻艨梢杂蓪ｉT配送人員免費送貨上門貨快遞，外地客戶當天下單當天免費快遞送貨上門。
［技術服務］凡購買子科生物子科生物任何一款ELISA酶聯(lián)免疫分析檢測試劑盒，都可以享受免費代測服務，外地客戶可以由技術老師的指導下正確放置好樣本的保存方式后快遞郵寄到我公司技術部，本地客戶可以享受免費上門取樣服務！
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大鼠誘導型NO合酶（iNOS）ELISA檢測試劑盒本試劑盒僅供課題研究使用
自備材料：
1. 蒸餾水。
2. 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。
 
樣品收集、處理及保存方法：
1、 血清……操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿……EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液……1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿……將組織加入適量理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。
5、 保存……如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
 
操作注意事項：
● 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
● 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
● 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
● 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
● 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
● 底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
● 加入試劑的順序應*，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
● 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
 
安全性： 
1. 避免直接接觸終止液和底物A、B，一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2. 實難中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
 
試劑的準備：
1. 標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：
500pg/ml（6號標準品）  原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
250pg/ml（5號標準品）  100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
125pg/ml（4號標準品）  100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
62.5pg/ml（3號標準品）  100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
31.2pg/ml（2號標準品）  100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
15.6pg/ml（1號標準品）  100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0pg/ml   （空白對照）   原倍濃度不用稀釋直接加入50ul 
2. 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。
 
試劑盒性能： 
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
 
操作步驟：
1. 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
4. 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5. 每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。
8. 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。
 
結果判斷與分析：
1、 儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、 以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的LTB4標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的LTB4含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

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