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上海邦景實業(yè)有限公司
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ELISA實驗詳細的浸泡式洗板步驟
2025-7-1 閱讀(1)
在ELISA實驗中，浸泡式洗板步驟是至關(guān)重要的，用于去除未結(jié)合的抗體、抗原和酶標記物，從而減少背景信號，提高檢測的特異性和靈敏度。以下是詳細的浸泡式洗板步驟：
1. 準備洗液：
根據(jù)實驗需求，使用新鮮的PBS或TBS緩沖液配制洗滌緩沖液(如0.15M PBS，pH 7.4，含0.05% Tween20)。
確保洗液無菌，并且在使用前已經(jīng)預冷至室溫或?qū)嶒炈璧臏囟取?br />
2. 移除舊液：
從微孔板中移除反應液，盡量不要讓孔中的液體滴入相鄰孔中。
可以通過輕輕拍打板子背面，或使用吸水紙輕輕吸干板子表面的殘留液體。
3. 加洗液：
使用移液器或自動洗板機，向每個微孔中加入300μL350μL洗滌緩沖液，確保每孔都加滿。
對于自動洗板機，設置參數(shù)以保證每個孔的加液量一致。
4. 浸泡：
讓板子在室溫下浸泡30秒至1分鐘，以充分洗滌。
這段時間內(nèi)，未結(jié)合的物質(zhì)會溶解在洗滌緩沖液中。
5. 倒去洗液：
將板子傾斜，讓多余的洗液自然流出，或者使用吸水紙輕輕拍打板子背面，吸去殘留的液體。
對于自動洗板機，設置適當?shù)奈毫亢退俣龋苊馕^碰到孔底，減少交叉污染。
6. 重復：
重復上述步驟25，通常需要洗滌35次，具體次數(shù)根據(jù)實驗需求和試劑盒說明書而定。
每次洗滌后，確保板子干燥，避免殘留的水分影響后續(xù)反應。
7. 拍干：
最后一次洗滌后，使用干凈的吸水紙或濾紙輕輕拍干板子，確保沒有水分殘留。
避免使用衛(wèi)生紙，因其可能含有細小的纖維，導致孔底污染。
8. 準備下步操作：
洗滌完成后，立即進行下一步操作，如加酶標二抗或底物，以防止板子干燥。
如果需要等待，可以在板子上覆蓋一層保鮮膜，保持濕潤狀態(tài)。
通過嚴格遵循這些步驟，可以確保ELISA實驗的浸泡式洗板過程高效、準確，從而獲得可靠的結(jié)果。
