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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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人源細(xì)胞實(shí)驗(yàn)當(dāng)中問(wèn)題及解決方法
2018-9-14 閱讀(437)
人源細(xì)胞實(shí)驗(yàn)當(dāng)中問(wèn)題及解決方法
1 選擇試劑選擇質(zhì)量?jī)?yōu)異的檢測(cè)試劑，嚴(yán)峻按照試劑闡明書進(jìn)行操作，操作前將elisa試劑盒在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣可能原因：1）血清或血漿標(biāo)本分別欠好即進(jìn)行加樣；2）手工操作中，加樣板過(guò)多構(gòu)成加樣后放入孵箱前等候時(shí)間過(guò)長(zhǎng)；3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺起孔外。解決辦法：1）標(biāo)本為血清：將血液先天然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：有必要運(yùn)用含抗凝劑的血液標(biāo)本搜集管，采血后有必要當(dāng)即倒置混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。2)加樣后及時(shí)放入孵箱。3)加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。4)如果選用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。5)標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
3 孵育可能原因：1)孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸騰，吸附于孔壁，難于清洗*；2)孵育時(shí)間人為延伸，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。解決辦法：1)貼封片或加蓋；2)按闡明進(jìn)程嚴(yán)峻控制操作時(shí)間。
4 洗板可能原因：1)選用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。2)選用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量缺少，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。3)反應(yīng)板過(guò)多構(gòu)成洗板等候時(shí)間長(zhǎng)。解決辦法：1)保證洗液注滿各孔，洗板針疏通，洗完板后在吸水紙上輕輕拍干；2)合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5 顯色可能原因：1顯色劑后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或運(yùn)用過(guò)期顯色劑；2)加顯色劑時(shí)濺起孔外構(gòu)成液體回流。解決辦法：1)顯色劑盡量在臨用前，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用；2)加樣時(shí)堅(jiān)持顯色劑不外流；3)A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 中止可能原因如加中止液時(shí)發(fā)作較多氣泡，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加中止液時(shí)應(yīng)避免發(fā)作氣泡。
7 讀板如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
