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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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pc12細(xì)胞的復(fù)蘇和培養(yǎng)
2019-3-22 閱讀(1023)
PC-12細(xì)胞是一個(gè)常用的神經(jīng)細(xì)胞株。 來(lái)源： Rattus norvegicus (褐家鼠) 腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤（一種交感神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤） 形態(tài)：多角型細(xì)胞 生長(zhǎng)特性：貼壁較松，容易成團(tuán) 注釋：PC-12細(xì)胞株來(lái)源于一種可移植的鼠嗜鉻細(xì)胞瘤，該細(xì)胞對(duì)神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）有可逆的神經(jīng)元顯形反應(yīng)，該細(xì)胞不合成腎上腺素。 培養(yǎng)液：Ham's F12K （含2 mM L-，1.5 g/L NaHCO3）+15%馬血清+2.5% 胎牛血清。 傳代：吸去培養(yǎng)液。 加入新的培養(yǎng)液，用吸管吹下細(xì)胞或用手拍打培養(yǎng)瓶或刮下細(xì)胞到培養(yǎng)液中，用移液器把細(xì)胞吹散。 加適量的細(xì)胞到新的培養(yǎng)器皿中。（以1：4為宜，傳代期間2-3天更換培養(yǎng)液） 凍存：95%培養(yǎng)液+5%DMSO凍存于液氮。 PC12細(xì)胞來(lái)源大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞瘤,廣泛用于神經(jīng)系統(tǒng)疾病的體外研究。
從液氮罐中取出盛有pc12細(xì)胞的塑料螺口小瓶，立即投入37℃溫水中，并不時(shí)搖動(dòng)令其盡快融化，然后從37℃水浴中取出塑料螺口小瓶，用酒精消毒后用吸管吸出細(xì)胞懸浮液，注入離心管并加入10倍培養(yǎng)液，混合后離心(一千轉(zhuǎn)每分鐘，五分鐘)除去上清液，再重復(fù)用培養(yǎng)液洗一次。然后用培養(yǎng)液稀釋成1x十的四次方個(gè)每毫升密度的細(xì)胞懸液，接種于75平方厘米塑料培養(yǎng)瓶中，每皿十毫升，置于37度含百分之十二氧化碳的培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)液由百分之九十的DMEM、百分之五胎牛血清、百分之五馬血清、0.01%組成。
