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人乙肝(HBV)elisa試劑盒樣品處理及操作步驟

2019-5-31  閱讀(137)

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【詳細說明】

                       人乙肝(HBV)elisa試劑盒樣品處理及操作步驟

樣品收集、處理及保存方法

1、 血  清-----操作過程中避免任何細胞刺激,使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細

胞迅速小心地分離。

2、 血  漿----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測,1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、 細胞上清液--1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、 組織勻漿---將組織加入適量鹽水搗碎,1000×g離心10分鐘,取上清液。

5、 保  存----如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-80 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,如果

血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾,不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

操作步驟

1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。

2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),每個標準品和空白孔建議做復孔,每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使

用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內(nèi)。

3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的標記的抗體,蓋上膜板,輕輕振蕩

混勻,37℃溫育1小時。

4. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次,如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加

一次。

5. 每孔加入50ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

6. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次,如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加

一次。

7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。

8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結(jié)果。

9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。

 



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