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Nature Methods綜述:果蠅的基因表達工具

時間:2012-1-12閱讀:881
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在本期的《Nature Methods》上,來自紐約大學生物學系的Claude Desplan等發(fā)表了一篇綜述,介紹了果蠅中研究基因表達和克隆分析的強大工具。

Claude Desplan是的發(fā)育遺傳學家,從事多年的果蠅發(fā)育研究。他所在實驗室主要研究兩個重要的發(fā)育問題:早期胚胎發(fā)育的進化以及色覺背后的視網(wǎng)膜和大腦電路的建立。
近年來遺傳技術的發(fā)展讓科學家們能夠操控果蠅中的基因表達,進行細胞標記、基因功能分析或細胞譜系追蹤。自經(jīng)典的GAL4-UAS系統(tǒng)被開發(fā)出來后,研究人員又開發(fā)出多種方法,利用其他表達系統(tǒng)以及位點特異性的重組酶來操控并標記細胞群體。

Gal4-UAS系統(tǒng)于1993年被開發(fā)出來。這個來源于酵母的系統(tǒng)可以特異地提高果蠅基因在體內的表達量。在Gal4-UAS系統(tǒng)中,Gal4是來源于酵母的轉錄因子,而UAS則是Gal4特異結合的DNA序列。因為果蠅基因組不編碼Gal4轉錄因子,所以在果蠅體內過量表達Gal4,不會對果蠅發(fā)育產(chǎn)生顯著影響。同樣,在果蠅體內插入UAS-目的基因片段,也不會對果蠅產(chǎn)生影響。因此,單獨含有Gal4或者UAS-gene的果蠅是發(fā)育正常的。但如果讓這兩個果蠅雜交,產(chǎn)生的后代的基因組中同時含有Gal4和UAS-目的基因,這樣,在Gal4的調節(jié)之下,這個基因的表達量就會提高。
在這篇綜述中,作者討論了近期的技術發(fā)展。他們認為,對于利用果蠅作為研究模型的科學家來說,這些發(fā)展大大擴展了可用的遺傳工具。

他們討論了GAL4-UAS系統(tǒng)如何激發(fā)了精密、多功能的表達系統(tǒng),如split-GAL4系統(tǒng)和QF-QUAS系統(tǒng),這些系統(tǒng)實現(xiàn)了復雜的基因操作。之后,他們又討論了由MARCM發(fā)展而來的克隆分析技術以及分析和操控組織和神經(jīng)網(wǎng)絡的強大方法。MARCM技術于1999年問世,可在果蠅活體內正向標記基因突變的細胞。
他們還介紹了克隆分析和基因操作的新興技術,如twin-spot generator(TSG)、twin-spot MARCM(TS-MARCM)和G-TRACE,以及zui近開發(fā)的多色標記方案。盡管目前的大部分工作都集中在這些方法在果蠅神經(jīng)系統(tǒng)中的應用,但這些工具本身可應用在任何組織。將這些技術應用到非神經(jīng)系統(tǒng)時,細胞類型特異或組織特異的driver是*限制。

這篇綜述為果蠅學家提供了一份遺傳工具的用戶指南。作者還提出了一些使用過程中的具體建議,并指導讀者如何根據(jù)具體實驗選擇工具。

來源:生物通

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