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上海士鋒生物科技有限公司
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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測培養(yǎng)基 維生素檢測培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測培養(yǎng)基 化妝品檢測培養(yǎng)基 動物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測培養(yǎng)基 支原體檢測培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測培養(yǎng)基 弧菌檢測培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測培養(yǎng)基 檢測培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測,增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

士鋒生物轉(zhuǎn)化步電穿孔法進(jìn)行質(zhì)體實驗

時間:2013-10-16閱讀:704
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儀器用具:

37℃培養(yǎng)箱及冰浴

Electroporation cuvette (electrode gap, 0.1 cm)

Electroporator (Bio-Rad, IBI geneZapper 或其它廠牌)

藥品試劑:

無菌水 (置冰浴中)

10% glycerol (置冰浴中)

SOB 液體培養(yǎng)基

SOB 固體培養(yǎng)基

SOC 液體培養(yǎng)基

SOC/Amp 固體培養(yǎng)基

大腸桿菌JM109

Ligation mixtures

方法步驟:

菌體的處理:

1) 進(jìn)行轉(zhuǎn)形實驗的前16~20 h,將菌種JM109 接種在SOB 固體培養(yǎng)基上,并在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

34 Methods in Biotechnology Vol 1

2) 取80 mL SOB培養(yǎng)基裝入250 mL滅過菌的三角瓶。 另取1 mL SOB加于微量離心管中。由SOB固體培養(yǎng)基上選8 個約2~3 mm大小的單一菌落接入1mL SOB中,震蕩將菌體打散后,加入80 mL SOB中,于37℃震蕩培養(yǎng)約2~3h,直至細(xì)胞數(shù)約為4~7×107/mL.

3) 收集菌液于離心管中,置冰浴中10 min.

4) 以750~1,000 g 離心12~15 min (4℃)。

5) 倒去上清,并盡量將液體倒干,或以微量移液器頭吸干凈。

6) 沉淀加入80 mL 冰冷的無菌水,稍加震蕩,混合均勻后以750~1,000 g 離心12~15 min (4℃)。

7) 倒去上清,菌體再依序以40 mL 及1.6 mL 無菌水同法處理。

8) 菌體以0.16 mL 冰冷的10% glycerol 懸濁。

9) 菌液每80 μL分裝一管,可直接用于electroporation,或以液態(tài)氮或干冰快速凍結(jié)后置 -70℃貯存。

Electroporation:

1) 進(jìn)行electroporation 的DNA 樣品溶液中離子強(qiáng)度不可過高,DNA 需先經(jīng)過透析或以酒精沉淀處理。透析可如2.3.1 節(jié)步驟15) 進(jìn)行。

2) Cuvettes 自包裝中取出后,置冰浴中至少5 min.

3) 將菌液置于冰浴中,加入DNA 樣品,混合后,小心將溶液吸至cuvette 的凹槽中,將cuvette 置冰浴中。

4) 進(jìn)行electroporation 時,將cuvette 由冰浴中取出,將四周水份擦干,置于反應(yīng)槽中,并接上電極線。

5) 以2.5 kV, 21 μF 進(jìn)行electroporation.

◆ 注意!高電壓!

6) 取出cuvette,立即加入1 mL SOC.

7) 吸出菌液移至微量離心管中,于37℃震蕩培養(yǎng)45 min.

8) 取200 μL 菌液涂布于SOC/Amp plate.置37℃培養(yǎng)16~20 h.

9) 觀察plate 上菌落的形狀并計算菌落數(shù)。
 

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