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?皮膚基底細(xì)胞癌細(xì)胞的操作步驟

時間:2025/1/16閱讀:121
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皮膚基底細(xì)胞癌細(xì)胞的操作步驟主要包括以下幾個方面:

細(xì)胞復(fù)蘇:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中),培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度2。

細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。輕輕吹打細(xì)胞,脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中2。

細(xì)胞凍存:細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次。添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min。用適量的凍存液重懸細(xì)胞,并放置于凍存管中。先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃1.5h,然后將其移入-80℃2。

以上就是皮膚基底細(xì)胞癌細(xì)胞的基本操作步驟。需要注意的是,這些操作應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行,以避免污染。


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