人白細(xì)胞介素（IL-）試劑盒實驗原理

使用目的：本人白細(xì)胞介素IL-試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白細(xì)胞介素（IL-）含量。

實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人白細(xì)胞介素IL-水平。用純化的人白細(xì)胞介素（IL-）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白細(xì)胞介素（IL-），再與HRP 標(biāo)記的白細(xì)胞介素（IL-）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細(xì)胞介素（IL-）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人白細(xì)胞介素（IL-）濃度。

人白細(xì)胞介素IL-試劑盒組成

30 倍濃縮洗滌液20ml× 瓶7 終止液6ml× 瓶

2 酶標(biāo)試劑6ml× 瓶8 標(biāo)準(zhǔn)品（240 ng/L） 0.5ml× 瓶

3 酶標(biāo)包被板2 孔×8 條9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液.5ml× 瓶

4 樣品稀釋液6ml× 瓶0 說明書 份

5 顯色劑A 液6ml× 瓶 封板膜2 張

6 顯色劑B 液6ml×/瓶2 密封袋 個

標(biāo)本要求

．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．人白細(xì)胞介素IL-不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

20 ng/L 5 號標(biāo)準(zhǔn)品50μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

60 ng/L 4 號標(biāo)準(zhǔn)品50μl 的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

30 ng/L 3 號標(biāo)準(zhǔn)品50μl 的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

5 ng/L 2 號標(biāo)準(zhǔn)品50μl 的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

7.5 ng/L 號標(biāo)準(zhǔn)品50μl 的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品0μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液：人白細(xì)胞介素IL-將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復(fù)5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色5 分鐘.

0.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

.測定：人白細(xì)胞介素IL-以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止液后5 分鐘以內(nèi)進行。

操作程序總結(jié)：
計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。