蘇木素復(fù)染時間的把握？
 
.蘇木素復(fù)染時間要看當(dāng)時的室溫、溶液的新舊、目標(biāo)抗原的定位等情況，一般數(shù)秒-數(shù)分鐘。不過這個如果染色不理想可以補(bǔ)救的。即：染色深則分化時間稍長些即可；染色淺則再置于蘇木素中染色即可。抗體
 
2.鹽酸酒精是分化，氨水是返蘭。作用不同。片子復(fù)染完后流水振洗，然后置于鹽酸酒精中數(shù)秒（動作一定要快）后拿出流水振洗，在放入氨水中返蘭即可。
 
3.如果分化的顏色過淺，可以復(fù)置于蘇木素中染色。
 
PBS 的清洗方式選擇、次數(shù)和時間的選擇？
 
.單獨(dú)沖洗，防止交叉反應(yīng)造成污染。
 
臨床上每天檢測的病例很多，所用的抗體種類及項(xiàng)目也多，如果在加入一抗孵育完后，將它們在一個缸內(nèi)洗，這樣就會造成交叉污染，影響zui后的結(jié)果。正確的做法是單獨(dú)地進(jìn)行沖洗，沖洗的 PBS 為一次性，保證切片沒有相互交叉污染的機(jī)會。
 
2.溫柔沖洗，防止切片的脫落。
 
沖洗切片，取出切片，將 PBS 從上輕輕地沖洗，讓 PBS 自上而下流下來，不要拿起切片將 PBS 對準(zhǔn)切片沖洗，這樣由于沖出的 PBS 有一定的沖擊力，很容易使切片周邊引起松動，導(dǎo)致切片的脫落。
 
3.沖洗的時間要足夠，才能*洗去結(jié)合的物質(zhì)。
 
沖洗切片有人提出用微振蕩器振染，振下未結(jié)合的各種物，使之不產(chǎn)生背景，此種做法一是浪費(fèi)時間，二是很容易導(dǎo)致切片的脫落。切片的沖洗據(jù)實(shí)踐認(rèn)為，用一小燒杯柔和地于切片上沖洗，就能*沖洗去未結(jié)合的物質(zhì)，無需附加其它條件，沖洗好于切片上再注入 PBS，持續(xù) 2 min 左右就*足夠了。
 
4.PBS 的 pH 和離子強(qiáng)度的使用和要求。
 
劉彥仿指出：中性及弱鹼性條件（pH7-8）有利于免疫復(fù)合物的形成，而酸性條件則有利于分解；低離子強(qiáng)度有利于免疫復(fù)合物的形成，而高離子強(qiáng)度則有利于分解。我們目前常用的 PBS 的 pH 在 7.4-7.6 ，濃度是 0.0 M，根據(jù)本室十幾年來的使用情況，認(rèn)為該溶液價格便宜配制方面，使用效果好。
 
5.常用試劑的配制和使用。
 
在免疫組織化學(xué)的染色過程中，用得zui多的試劑就是緩沖液，因?yàn)榍衅谡麄€染色中，抗體的加、換、切片的沖洗，DAB 的配制都離不開緩沖液。可見緩沖液在整個染色中都起至關(guān)鍵的作用，緩沖液的過酸或偏堿，都將影響染色的結(jié)果。