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DAPI染色

時間:2013-7-1閱讀:2524
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 DAPI染色原理:

DAPI 為一種熒光染料,可以穿透細胞膜與細胞核中的雙鏈DNA結(jié)合而發(fā)揮標記的作用,可以產(chǎn)生比DAPI自身強20多倍的熒光,和EB相比,對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。顯微鏡下可以看到顯藍色熒光的細胞,熒光顯微鏡觀察細胞標記的效率高(幾乎為100 %) ,且對活細胞無毒副作用。DAPI染色常用于細胞凋亡檢測,染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。DAPI也常用于普通的細胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。細胞經(jīng)熱激處理后用DAPI染色3分鐘,在熒光顯微鏡下可以看到到細胞核的形態(tài)變化。

a、 正常的煙草細胞核:核形完整,染色質(zhì)均勻。

b、染色質(zhì)固縮,向外周聚集,形成周邊化。

c、 染色質(zhì)進一步固縮,形成很多顆粒物質(zhì)。

d、 細胞核破裂形成碎片,核解體。

染色步驟
在細胞移植前,將DAPI 以一定的濃度加入培養(yǎng)基中,與細胞共同孵育過夜,用PBS 緩沖液漂洗至少6 次以洗掉未結(jié)合的DAPI,在用酶消化后離心收集細胞,加入DMEM 培養(yǎng)基制成細胞懸液以備用。
存儲條件:-20℃避光保存
每次使用,用量較少,可反復(fù)凍融,無需分裝
注意事項:
1、DAPI強烈致癌,操作時要戴上手套。

2、貯存液用70%酒精配制,濃度100 µg/ml,可用黑紙包住,長期凍存。使用液按1:1000用PBS稀釋,zui終濃度100 ng/ml。

3、DAPI是非常的DNA染料,固定過和沒有固定過的活細胞均可用。

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