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α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶試劑盒說明書

2017年09月18日 10:24:41人氣:350來源:齊一生物科技(上海)有限公司

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關(guān) 鍵 詞α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-Arabinofuranosidase, α-L-Af) 試劑盒說
【資料簡介】

α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-Arabinofuranosidase, α-L-Af) 試劑盒說明書 
                                                            分光光度法  50管/24樣 
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定 
測定意義:                            
α-L-Af  是一種能夠水解非還原呋喃阿拉伯糖殘基的糖苷酶類,使細(xì)胞壁阿拉伯半乳聚糖、
阿拉伯甘露聚糖等中性糖不斷解離,促進(jìn)果膠的增溶和降解。由于果實(shí)成熟過程中常常伴隨
著阿拉伯糖的喪失,該酶活性在果實(shí)成熟軟化中的研究具有重大意義。 
α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-Arabinofuranosidase, α-L-Af) 試劑盒說明書 測定原理: 
α-L-Af分解對硝基酚阿拉伯呋喃糖苷生成對-硝基苯酚,后者在 400nm有zui大吸收峰,通過
測定吸光值升高速率來計(jì)算 α-L-Af活性。 
自備用品: 
可見分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸
餾水。 
試劑組成和配制: 
提取液:液體50mL×1 瓶,4℃保存。 
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前每瓶加入5mL蒸餾水,充分溶解備用;用不完的試
劑仍-20℃保存。 
試劑二:液體15mL×1 瓶,4℃保存。 
試劑三:液體50mL×1 瓶,4℃保存。 
粗酶液提取: 
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量
(104
個):提取液體積(mL)為500~1000:1 的比例(建議 500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL提
取液) ,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲 3s,間隔10s,重復(fù)30 次);
15000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 
2、組織:按照組織質(zhì)量(g) :提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g組織,
加入 1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 
α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-Arabinofuranosidase, α-L-Af) 試劑盒說明書 測定步驟: 
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min以上,調(diào)節(jié)波長至 400nm,蒸餾水調(diào)零。 
2、樣本測定(在 EP管中依次加入下列試劑): 
試劑名稱(μL)  測定管  對照管 
試劑一  200   
蒸餾水    200 
試劑二  250  250 
樣本    50  50 
迅速混勻,放入 37℃準(zhǔn)確水浴30min 
試劑三  1000  1000 
充分混勻,400nm處測定吸光值 A,計(jì)算 ΔA=A測定-A對照。每個測定管需設(shè)一個對照管。  
α-L-Af活性計(jì)算: 
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為 y =0.00585x  -0.0027;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(nmol/mL) ,y為吸光
值。 
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算: 
單位的定義:每 mg組織蛋白每 min產(chǎn)生 1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。 
α-L-Af活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T 
=39.89×(ΔA+0.0027) ÷Cpr 
(2)按樣本鮮重計(jì)算: 
單位的定義:每 g組織每小時產(chǎn)生 1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。 
α-L-Af活性(nmol/min/g鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T 
=39.89×(ΔA+0.0027) ÷W 
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算: 
單位的定義:每 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞每小時產(chǎn)生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。 
α-L-Af活性(nmol/min/104
cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T   
=0.08×(ΔA +0.0027) 
Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.5mL;V樣:加入反應(yīng)體系中
樣本體積,0.05mL;V 樣總:加入提取液體積,1mL;W:樣本質(zhì)量,g;  500:細(xì)胞或細(xì)
菌總數(shù),500萬;T:反應(yīng)時間,30min。 

齊一生物科技(上海)有限公司作者

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