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酰基轉(zhuǎn)移酶(AAT)活性測定試劑盒

2019年11月19日 14:59:33人氣:361來源:南京億迅生物科技有限公司

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關(guān) 鍵 詞?;D(zhuǎn)移酶(AAT)活性測定試劑盒
【資料簡介】

測定意義:

AAT是一個多功能蛋白大家族,主要負責(zé)催化生物體內(nèi)各種?;腿ヵ;磻?yīng),在基因表達、代謝和信號傳導(dǎo)中具有重要作用。

測定原理:

AAT催化乙酰CoA轉(zhuǎn)移乙?;蕉〈?,同時還原DTNB生成TNB;TNB412nm有吸收峰,測定412nm吸光度增加速率,來計算AAT活性。

自備儀器和用品:

研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一:液體100 mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體25 mL×1瓶,4℃保存。

試劑三:粉劑×1管,-20℃保存。臨用前加蒸餾水1mL充分溶解,4℃保存。

試劑四:液體2 mL×1管,4℃保存。

試劑五:粉劑×1管,4℃避光保存。臨用前加入試劑二1mL充分溶解,4℃避光保存。

粗酶液提?。?/span>

稱取約0.1g樣品,加試劑一1mL,冰上充分研磨,16000g 4℃離心20min,取上清液待測。

AAT測定操作:

1. 分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長到412 nm,蒸餾水調(diào)零;水浴鍋35℃預(yù)熱。

2. 對照管:依次在500μL EP管中依次加入140μL試劑二、10μL試劑三、20μL試劑四和10μL試劑五,20μL待測液,室溫放置10min后于412nm測定吸光度,記為A1。

3. 測定管:依次在500μL EP管中依次加入140μL試劑二、10μL試劑三、20μL試劑四和20μL待測液,35℃水浴15min,加10μL試劑五,室溫放置10min后于412nm測定吸光度,記為A2△A=A2-A1。

AAT活性計算:

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1)按蛋白濃度計算

AAT活力單位定義:37℃中每毫克蛋白每分鐘催化吸光值變化0.001個單位為1U。

AAT (U/mg prot) = 1000×△A×V÷(Cpr×V) ÷T= 666.7×△A÷Cpr

2按樣本鮮重計算

AAT活力單位定義:37℃中每克組織每分鐘催化吸光值變化0.001個單位為1U

AAT (U/g 鮮重) = 1000×△A×V÷(V÷V樣總×W) ÷T= 666.7×△A÷W

Cpr:上清液蛋白濃度,mg/mL,蛋白質(zhì)濃度需要另外測定;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,0.02mL;V總:反應(yīng)總體積,0.2 mL;W 樣品質(zhì)量;V樣總:提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,15min。

b.使用96孔板測定的計算公式如下

1)按蛋白濃度計算

AAT活力單位定義:37℃中每毫克蛋白每分鐘催化吸光值變化0.0005個單位為1U。

AAT (U/mg prot) = 2000×△A×V÷(Cpr×V) ÷T=1333.4×△A÷Cpr

2按樣本鮮重計算

AAT活力單位定義:37℃中每克組織每分鐘催化吸光值變化0.0005個單位為1U。

AAT (U/g 鮮重) = 2000×△A×V÷(V÷V樣總×W) ÷T= 1333.4×△A÷W

Cpr:上清液蛋白濃度,mg/mL,蛋白質(zhì)濃度需要另外測定;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,0.02mL;V總:反應(yīng)總體積,0.2 mLW 樣品質(zhì)量;V樣總:提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,15min

注意事項:

上清液蛋白質(zhì)含量需要另外測定。建議購買本公司生產(chǎn)的BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。

南京億迅生物科技有限公司作者

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