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      技術(shù)中心

      葡萄糖氧化酶試劑盒說明書

      2021年06月02日 11:49:06人氣:1170來源:信帆生物

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      關(guān) 鍵 詞葡萄糖氧化酶
      【資料簡介】
      葡萄糖氧化酶(glucose oxidaseGOD)試劑盒說明書
      分光光度法 50 /24
      正式測定前取 2-3 個預(yù)期差異的樣本做預(yù)測定
      測定意義
      GODEC 1.1.3.4)廣泛存在于動物、和植物中,催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸,并產(chǎn)生 H2O2
      是生物體中產(chǎn)生活性氧的代謝途徑之一。
      測定原理
      GOD 催化產(chǎn)生 H2O2,過氧化物酶催化 H2O2氧化 4-氨基安替比林偶聯(lián)酚,生成有色化合物,
      500 nm 有特征吸收峰,顏色深淺與 GOD 活性成線性關(guān)系。
      試驗中所需的儀器和設(shè)備
      可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸
      餾水
      試劑的組成和配制
      提取液:液體 60mL×1 瓶,4℃保存;
      緩沖液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;
      試劑一:粉劑×1 瓶,-20℃保存;臨用前加入 20mL 緩沖液充分溶解待用;用不完的試劑 4
      保存一個月;
      試劑二:粉劑×1 瓶,-20℃保存;臨用前加入 20mL 緩沖液充分溶解待用;用不完的試劑 4
      保存一個月;
      樣品測定的準(zhǔn)備
      1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:
      細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量
      104個):提取液體積(mL)為 500~10001 的比例(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
      取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
      8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
      組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,
      加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
      2、血清(漿)樣品:直接檢測。
      測定步驟
      1、 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 500nm,蒸餾水調(diào)零。
      2、 試劑一和試劑二的配制:參見試劑的組成和配制。
      3、煮沸樣本的準(zhǔn)備:取 500μL 樣本至新的 EP 管中,95℃水浴 10min,冷卻至室溫后,8000g
      4℃離心 10min,取上清作為對照管的煮沸樣本待測。
      4、測定操作表
      試劑(μL)    對照管    測定管
      樣本                              250
      煮沸樣本          250
      試劑一             375        375
      試劑二             375        375
      混勻,35'C 保溫 15min 后,于 500nm 波長處讀取吸光度。ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測
      定管需設(shè)一個對照管。GOD 活力單位的計算
      1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為 y = 2.8348x - 0.0169;x H2O2標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/mL),y
      為ΔA。
      1、血清(漿)GOD 活力的計算
      單位定義mL 血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol H2O2為一個酶活力單位。
      GODnmol/min/mL= (ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反總÷V ÷T×1000=58.8×(ΔA+0.0169)
      2、細(xì)菌、細(xì)胞或組織 GOD 活力的計算
      1)按蛋白濃度計算
      單位定義mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol H2O2為一個酶活力單位。
      GODnmol/min/mg prot=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反總÷(V ×Cpr) ×1000÷T
      =58.8×(ΔA+0.0169)÷Cpr
      2)按樣本鮮重計算
      單位定義:每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol H2O2為一個酶活力單位。
      GODnmol/min/g 鮮重)=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反總÷(W×V ÷V 樣總) ×1000÷T
      =58.8×(ΔA+0.0169)÷W
      3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算
      單位定義:每一萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol H2O2為一個酶活力單位。
      GODnmol/min/104 cell=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反總÷(500×V ÷V 樣總) ×1000÷T
      =0.118×(ΔA+0.0169)
      V 反總:反應(yīng)體系總體積,0.625mL; V 樣:加入樣本體積,0.25mLV 樣總:加入提取
      液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,15 min; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;
      500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500

      信帆生物作者

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