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技術(shù)中心

禽流感抗體試劑盒說明書

2012年05月31日 10:45:05人氣:1942來源:上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司

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關(guān) 鍵 詞禽流感抗體試劑盒,禽流感抗體檢測(cè)試劑盒,禽流感檢測(cè)試劑盒
【資料簡(jiǎn)介】

 

禽流感抗體( AIV-Ab)酶聯(lián)免疫分析
 
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
 
 
96T
使用目的:
本試劑盒用于測(cè)定血清、血漿及相關(guān)液體樣本中禽流感抗體( AIV-Ab)表達(dá)。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中禽流感抗體( AIV-Ab)表達(dá)。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中禽流感抗體( AIV-Ab)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合,形成抗原 -抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。 TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度( OD值),與 CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中禽流感抗體( AIV-Ab)的存在與否。
試劑盒組成

1
30倍濃縮洗滌液
20ml×1
7
終止液
6ml×1
2
酶標(biāo)試劑
6ml×1
8
陽性對(duì)照
0.5ml×1
3
酶標(biāo)包被板
12孔 × 8
9
陰性對(duì)照
0.5ml×1
4
樣品稀釋液
6ml×1
10
說明書
1
5
顯色劑 A
6ml×1
11
封板膜
2
6
顯色劑 B
6ml×1/
12
密封袋
1個(gè)

標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于 -20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的( HRP)活性。操作步驟
1.編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2孔、陽性對(duì)照 2孔、空白對(duì)照 1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2.加樣:分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照 50µl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測(cè)樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘。
4.配液:將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此重復(fù) 5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻, 37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測(cè)定:以空白空調(diào)零, 450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度( OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
 
操作程序總結(jié):
計(jì)算和結(jié)果判定:試驗(yàn)有效性:陽性對(duì)照孔平均值 ≥1.00;陰性對(duì)照平均值 ≤0.10臨界值( CUT OFF)計(jì)算:臨界值 =陰性對(duì)照孔平均值 +0.15陰性判定:樣品 OD<臨界值( CUT OFF)者為禽流感抗體( AIV-Ab)陰性陽性判定:樣品 OD臨界值( CUT OFF)者為禽流感抗體( AIV-Ab)陽性
。注意事項(xiàng)
1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請(qǐng)避光保存。
6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),參考波長(zhǎng)為 630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M的硫酸,使用時(shí)必須注意安全。保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期: 6個(gè)月

標(biāo)本收集方法:
1. 血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清

。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
3. 尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參

照此實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
5. 培養(yǎng)細(xì)胞
    檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試

劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離

心。
6. 組織標(biāo)本
    切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量

的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分

裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。

上海勁馬生物科技有限專業(yè)SYK elisa試劑盒生產(chǎn)商,SYK elisa試劑盒代理商,SYK elisa試劑盒批發(fā),本公司試劑盒種類齊全,包括人、大鼠、

小鼠、兔、羊、馬、牛、豚鼠、猴、魚、植物、食品等,近千種試劑盒已經(jīng)投入市場(chǎng),被廣大科研工作者所使用,備受客戶的青睞

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上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司作者

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