豬瘟抗體（CSF-Ab）ELISA試劑盒說明書

【資料簡介】

 

豬瘟抗體（CSF-Ab）ELISA

 

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

 

 

96T

使用目的：

本試劑盒用于測(cè)定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中瘟抗體（ CSF-Ab）表達(dá)。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中豬瘟抗體（CSF-Ab）表達(dá)。用純化的豬瘟抗原包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中豬瘟抗體（CSF-Ab）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP標(biāo)記的豬瘟抗原結(jié)合，形成抗原 -抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在 HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm波長下測(cè)定吸光度（ OD值），與 CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中豬瘟抗體（ CSF-Ab）的存在與否。

試劑盒組成

1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶 2 酶標(biāo)試劑 6ml×1瓶 8 陽性對(duì)照 0.5ml×1瓶 3 酶標(biāo)包被板 12孔×8條 9 陰性對(duì)照 0.5ml×1瓶 4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份 5 顯色劑 A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 6 顯色劑 B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個(gè)

標(biāo)本要求

1           標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于 -20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2           NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（ HRP）活性。

 

操作步驟

1.編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2孔、陽性對(duì)照 2孔、空白對(duì)照 1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）

2.加樣：分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照 50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測(cè)樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘。

4.配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此重復(fù) 5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3。

8.洗滌：操作同 5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻， 37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測(cè)定：以空白空調(diào)零， 450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度（ OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

 

計(jì)算和結(jié)果判定：

試驗(yàn)有效性：陽性對(duì)照孔平均值 ≥1.00; 陰性對(duì)照平均值 ≤0.10臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值 +0.15陰性判定：樣品 OD值<臨界值（CUT OFF）者為豬瘟抗體（CSF-Ab）陰性陽性判定：樣品 OD值≥臨界值（CUT OFF）者為豬瘟抗體（CSF-Ab）陽性

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注意事項(xiàng)

1．操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請(qǐng)避光保存。

6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長檢測(cè)時(shí)，參考波長為 630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M的硫酸，使用時(shí)必須注意安全。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期： 6個(gè)月