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技術(shù)中心

豬瘟抗體(CSF-Ab)ELISA試劑盒說明書

2012年10月25日 10:04:42人氣:1200來源:上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司

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關(guān) 鍵 詞豬瘟抗體(CSF-Ab)試劑盒,豬瘟抗體(CSF-Ab)試劑盒說明書,豬瘟抗體(CSF-Ab)檢測(cè)方
【資料簡介】

 

豬瘟抗體(CSF-Ab)ELISA
 
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
 
 
96T
使用目的:
本試劑盒用于測(cè)定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中瘟抗體( CSF-Ab)表達(dá)。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中豬瘟抗體(CSF-Ab)表達(dá)。用純化的豬瘟抗原包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中豬瘟抗體(CSF-Ab)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP標(biāo)記的豬瘟抗原結(jié)合,形成抗原 -抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm波長下測(cè)定吸光度( OD值),與 CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中豬瘟抗體( CSF-Ab)的存在與否。
試劑盒組成

1
30倍濃縮洗滌液
20ml×1
7
終止液
6ml×1
2
酶標(biāo)試劑
6ml×1
8
陽性對(duì)照
0.5ml×1
3
酶標(biāo)包被板
12孔×8
9
陰性對(duì)照
0.5ml×1
4
樣品稀釋液
6ml×1
10
說明書
1
5
顯色劑 A
6ml×1
11
封板膜
2
6
顯色劑 B
6ml×1/
12
密封袋
1個(gè)

標(biāo)本要求
1           標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于 -20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2           NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的( HRP)活性。
 
操作步驟
1.編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2孔、陽性對(duì)照 2孔、空白對(duì)照 1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2.加樣:分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照 50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測(cè)樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘。
4.配液:將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此重復(fù) 5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻, 37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測(cè)定:以空白空調(diào)零, 450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度( OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
 
計(jì)算和結(jié)果判定:
試驗(yàn)有效性:陽性對(duì)照孔平均值 ≥1.00; 陰性對(duì)照平均值 ≤0.10臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值 +0.15陰性判定:樣品 OD<臨界值(CUT OFF)者為豬瘟抗體(CSF-Ab)陰性陽性判定:樣品 OD臨界值(CUT OFF)者為豬瘟抗體(CSF-Ab)陽性
。
注意事項(xiàng)
1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請(qǐng)避光保存。
6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長檢測(cè)時(shí),參考波長為 630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M的硫酸,使用時(shí)必須注意安全。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期: 6個(gè)月
 
 

上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司作者

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