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熒光素標記突觸泡蛋白2A抗體IgG,Anti-SV2A/FITC

2013年02月28日 14:00:29人氣:178來源:上海安研商貿(mào)有限公司

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【資料簡介】

熒光素標記突觸泡蛋白2A抗體IgG,Anti-SV2A/FITC

Western bloting要注意的一些問題
1
、為了讓實驗更加嚴謹有說服力都要設(shè)計對照實驗,對照分為:陽性對照(有標準品(比如β-actin,GAPDH)或陽性血清);陰性對照(測血時用相應(yīng)小鼠未免疫血清(即正常血);空白對照(不加一抗,用PBS代替);無關(guān)對照(用無關(guān)抗體)
2
、一抗、二抗的濃度一般要參照抗體說明書選擇zui適當(dāng)?shù)谋壤,一抗二抗的選擇直接影響實驗結(jié)果以及背景的深淺。
3
、實驗設(shè)計時所釆用的抗原批次要一樣,盡量的避免人為的帶來個體差異。特別在做裂解液時更要注意所釆用的操作條件,盡可能的排除可變因素給實驗帶來不確定性。
4
、凝膠的質(zhì)量直接影響以后的實驗結(jié)果,要特別注意幾點:凝膠要均一沒有氣泡;積層膠與分離膠界面要水平;APTEMED的量不能過多,太多會導(dǎo)致膠易脆裂;拔梳子時要快,盡量保證點樣孔平整。
5
、電泳、轉(zhuǎn)膜時特別要注意正負極,電壓電流都不能過高;轉(zhuǎn)膜時三明治的疊放次序不錯,同時要防止產(chǎn)生氣泡;盡量讓電轉(zhuǎn)溫度保持在10度以下,冰浴為宜。
6
、封閉時一般在室溫下2h就夠了,但是要注意如果是*標記的二抗就不宜用牛奶,因為牛奶中含有*,用BSA效果更好。
7
、加一抗二抗要嚴格保證反應(yīng)時間,洗膜要注意盡可能地將一抗二抗洗凈,有利于降低背景;還要注意一抗二抗的匹配。
8
、在顯色發(fā)光時要特別注意二抗所對應(yīng)的顯色方法,特別是在發(fā)光時要注意發(fā)光時間和顯影時間的控制,以看得清楚目的條帶為標準。

上海安研商貿(mào)有限公司作者

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