柱式軟體RNAOUT

【資料簡(jiǎn)介】

柱式軟體RNAOUT
產(chǎn)品及特點(diǎn) 本產(chǎn)品專門從各種軟體組織樣品中快速提取總RNA的試劑盒，它能有效克服傳統(tǒng)TRIzol方法提取軟體組織RNA時(shí)，十分容易產(chǎn)生糖蛋白和酸性多糖污染這一缺點(diǎn)。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 適用于用常規(guī)方法難以提取的、各種富含多糖的軟體動(dòng)物動(dòng)物，包括螺類、貝類、烏賊、章魚和蝸牛等。
2. 能有效去除糖蛋白、粘蛋白污染，OD260/280一般均在1.9以上。
3. RNA產(chǎn)率一般為5-15 ug/100 mg。
4. 操作簡(jiǎn)單，整個(gè)提取過(guò)程一般只需要10多分鐘。
5. 得到的RNA可以直接用于RT-PCR、Northern雜交、mRNA純化、Primer Extension、RNA Protection、in vitro translation等研究。
規(guī)格及成分 成 份 50次紙盒包裝
溶液A 50 mL
溶液B 15 mL
溶液C 25 mL
離心吸附柱 50套
通用洗柱液 50 mL
RNA洗脫液 10 mL
使用手冊(cè) 1份

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期一年。
自備試劑 氯仿。
使用方法 1. 先將50-200 mg新鮮或冷凍的軟體組織液氮研磨成粉，加入1 mL溶液A溶解（溶液A使用前必須放在65℃水浴使沉淀*溶解并搖晃混勻），然后將研磨物轉(zhuǎn)移到新的1.5 mL離心管中, 振蕩混合30秒。也可以將軟體*碎后與溶液A一起用Polytron勻漿機(jī)（內(nèi)切式勻漿機(jī)）勻漿5-20秒，再轉(zhuǎn)移到1.5 mL離心管中。勻漿時(shí)會(huì)產(chǎn)生泡沫，但不影響提取效果。
2. 在離心管中加入0.3 mL的溶液B和0.2 mL自備氯仿，在振蕩器上振蕩30秒混勻，此時(shí)溶液呈均勻的乳濁狀。振蕩器振蕩時(shí)必須使管底溶液震蕩起來(lái)。
3. 室溫12000-15000 g離心3-5分鐘，兩相間將有約5-10毫米厚的細(xì)胞破碎物。
4. 將上清液（約0.6 mL）轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5 mL塑料離心管中，下層有機(jī)相和中間層含有DNA、蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)，避免觸及或吸取。留下100 uL上清液不取。
5. 加入等體積的溶液C，充分顛倒混勻。
6. 將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，12000-15000 g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
7. 將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中， 12000-15000 g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
8. 加0.7 mL通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。
9. 加0.3 mL通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。此步可以省略。
10. 室溫離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的乙醇會(huì)影響RNA的使用。
11. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到自備的RNase-free離心管中，加入50-100 uL RNA洗脫液，室溫放置1-2分鐘。
12. 12000-15000 g室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA完整性的電泳檢測(cè)：如果需要做Northern雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA分子（BioTechniques，28：414，2000）。
14. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測(cè)定：將5-10 μL RNA溶于TE緩沖液中（pH7.5-8.2之間）檢測(cè)其在OD260的光吸收。通過(guò)光吸收可以得出RNA濃度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），進(jìn)而計(jì)算出RNA的產(chǎn)量（濃度X體積）和產(chǎn)率（RNA產(chǎn)量/組織用量）。注意：測(cè)定OD時(shí)不要稀釋過(guò)度，否則濃度會(huì)在儀器能測(cè)的范圍之外。本方法提取的RNA測(cè)OD時(shí)一般zui多只能稀釋10-20倍。
15. RNA純度測(cè)定：無(wú)污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間（具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān)），高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。