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細(xì)胞樣本的前處理

2015年09月18日 08:59:35人氣:350來源:江萊生物-中國(guó)老牌試劑供應(yīng)商

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關(guān) 鍵 詞細(xì)胞樣本的前處理
【資料簡(jiǎn)介】

一、勻漿介質(zhì)

一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可根據(jù)樣本及測(cè)定指標(biāo)的情況自行設(shè)定濃度,目的是保持樣本的等滲環(huán)境。

二、細(xì)胞樣本的前處理:

1、細(xì)胞沉淀的收集:

① 懸浮細(xì)胞: 對(duì)于懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞,直接通過離心收集細(xì)胞沉淀,將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,棄上清留細(xì)胞沉淀。

② 貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,用*將細(xì)胞消化下來,或用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下來,將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,棄上清留細(xì)胞沉淀。

我們一般建議客戶,細(xì)胞密度不要小于一百萬個(gè)/ml。

2、細(xì)胞沉淀的洗滌:

在細(xì)胞沉淀中加入0.5-1ml的PBS (等滲), 輕輕顛倒混勻,將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,棄上清留細(xì)胞沉淀。

重復(fù)上述操作反復(fù)洗滌1~2次。

3、勻漿的方式:手工勻漿,超聲破碎,裂解液裂解,反復(fù)凍融。

① 手工勻漿:在細(xì)胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根據(jù)所測(cè)指標(biāo)的不同而有所改變,一般加入0.5ml,細(xì)胞密度不小于一百萬個(gè)/ml),混勻,將細(xì)胞懸浮于PBS中,用移液器將細(xì)胞懸浮液移至玻璃勻漿管中(2ml玻璃勻漿管),將玻璃勻漿管置于冰水混合物中,手動(dòng)勻漿3分鐘,然后取破碎好的細(xì)胞懸浮液進(jìn)行測(cè)定。

② 超聲破碎:

在細(xì)胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根據(jù)所測(cè)指標(biāo)的不同而有所改變,一般加入0.5ml,細(xì)胞密度不小于一百萬個(gè)/ml),混勻,將細(xì)胞懸浮于PBS中,在冰水浴條件下進(jìn)行如下操作:

     a、用超聲粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎,可用Soniprep150型超聲波發(fā)生器以振幅14微米超聲處理30秒使細(xì)胞破碎,也可用國(guó)產(chǎn)超聲波發(fā)生儀,用400安培,5秒/次,間隙10秒反復(fù)3~5次。

      b、用超聲細(xì)胞破碎儀,300W功率,每次超聲3~5秒,間隔30秒,重復(fù)4~5次。

③ 裂解液裂解 

常用裂解液有SDS、NP-40、TritonX-100,這三種去垢劑的作用是不同的,或者說作用力量強(qiáng)弱不同。

1、SDS屬于離子型去垢劑,zui厲害,基本可以把細(xì)胞*破掉,DNA會(huì)釋放出來,裂解液變得很粘稠。

2、NP-40是很溫和的去垢劑,1%濃度的基本可以破壞掉胞膜,而對(duì)核膜破壞的作用弱,結(jié)合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白。

3、TritonX-100的能力介于NP40和SDS之間,偏向于NP40,也是常用的細(xì)胞裂解液成分之一,在保護(hù)蛋白活性方面有一定作用(SDS基本會(huì)使蛋白變性失活)。

去垢劑屬性只是一方面,buffer、配比、濃度、提取方法和材料處理也都是關(guān)鍵因素

由于很多裂解液都是蛋白變性劑,對(duì)酶活力的測(cè)定有一定的影響,一般不*用裂解液進(jìn)行裂解。

④ 反復(fù)凍融:

在細(xì)胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根據(jù)所測(cè)指標(biāo)的不同而有所改變,一般加入0.5ml,細(xì)胞密度不小于一百萬個(gè)/ml),混勻,將細(xì)胞懸浮于PBS中,放低溫冰箱中結(jié)冰,溶解,再結(jié)冰,再溶解,反復(fù)3次左右)。

                由于反復(fù)凍融對(duì)酶活力影響較大,一般不*使用


產(chǎn)品:

刺人參苷S標(biāo)準(zhǔn)品,cas:226572-11-8對(duì)照品
豬膽粉對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
[4-(3-甲基苯氨基)-3-吡啶磺酰胺](拖拉塞米雜質(zhì)A)標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*系統(tǒng)適用性對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
異鼠李素標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
鹽酸三羥芐基芐絲肼對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
硫乙醇酸鹽流體對(duì)照培養(yǎng)基
精噁唑禾草靈標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品
*標(biāo)準(zhǔn)品,cas:114-49-8對(duì)照品
羥基*A對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
九里香酮標(biāo)準(zhǔn)品,cas:19668-69-0對(duì)照品
木犀草苷標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
異型南五味子丁素對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
酰嘧磺隆標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:120923-37-7
石斛酚對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
芹菜素-7-O-葡萄糖苷標(biāo)準(zhǔn)品,cas:578-74-5對(duì)照品
老龍皮酸(網(wǎng)脊衣酸)對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
白頭翁皂苷D標(biāo)準(zhǔn)品,cas:68027-15-6對(duì)照品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
CAS:40957-83-3,黃豆黃素標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
西洋參標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
人參皂苷Rgl對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂(YPD)對(duì)照培養(yǎng)基
CAS:2115-91-5,石斛堿標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
S-氰戊菊酯標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品
虎杖葉對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
人參皂苷 R-Rg3標(biāo)準(zhǔn)品,cas:38243-03-7對(duì)照品
麥芽對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
阿洛西林標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
CAS:51330-27-9,大豆皂苷Bb標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
異肥皂草苷標(biāo)準(zhǔn)品,cas:19416-87-6對(duì)照品
CAS:74805-92-8,甲基麥冬二氫高異黃酮A標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
秦皮素對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
川牛膝對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
CAS:149-64-4,丁溴酸東莨菪堿標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
EPA芳香有機(jī)揮發(fā)物Method503.1-Mix2標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品
鈹標(biāo)準(zhǔn)溶液,cas:7440-41-7
CAS:23696-28-8,喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格
黑豆對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
原海蔥甙A標(biāo)準(zhǔn)品,cas:466-06-8對(duì)照品
雙硫化合物對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
人參皂苷Rg5標(biāo)準(zhǔn)品,cas:186763-78-0對(duì)照品
偽金絲桃素標(biāo)準(zhǔn)品,cas:55954-61-5對(duì)照品
白花前胡乙素對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
CAS:88901-41-1,羅漢果苷  IVa標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
梔子黃素 B標(biāo)準(zhǔn)品,cas:2798-20-1對(duì)照品
水胺硫磷標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格
3,4,5-*基苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
大戟二烯醇對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
CAS:10380-28-6,8-羥基喹啉銅標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格
桃葉珊瑚苷對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
Australine Hydrobromide標(biāo)準(zhǔn)品,cas:118396-02-4對(duì)照品
咪鮮胺標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:67747-09-5
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
CAS:632-85-9,漢黃芩素標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
丹皮酚對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
2,2,3,3,4,4,5,56,6-十溴代-1,1-聯(lián)苯標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:13654-09-6
丙體六六六-異辛烷溶液標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品
側(cè)柏葉標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
金銀花對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
3,6'-二芥子?;崽菢?biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
槐米標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
洗碗葉對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
馬布特羅標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:54240-36-7
羥基積雪草苷對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
氟氯西林對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
乙酰哈巴苷標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
CAS:26530-20-1,2-辛基-4-異噻唑啉-3-酮(OIT)標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格

江萊生物-中國(guó)老牌試劑供應(yīng)商作者

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