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轉(zhuǎn)移因子(TF)ELISA試劑盒說(shuō)明書

2016年07月06日 15:34:52人氣:152來(lái)源:上海一研生物科技有限公司

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【資料簡(jiǎn)介】

轉(zhuǎn)移因子(TF)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書

 

本試劑盒僅供研究使用。

 

 

  96T

 

 

使用目的:

本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中流行性腦脊髓膜炎抗體(MM  Ab)表

達(dá)。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中人流行性腦脊髓膜炎抗體(MM Ab)表達(dá)。用純化的抗

原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中流行性腦脊髓膜炎抗體(MM Ab)相結(jié)合,經(jīng)洗滌

除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的抗原結(jié)合,形成抗原 抗體 酶標(biāo)抗原復(fù)合

物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作

用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),與 CUTOFF 值相

比較,從而判定標(biāo)本中人流行性腦脊髓膜炎抗體(MM Ab)的存在與否。

試劑盒組成

 

1 30 倍濃縮洗滌液

2 酶標(biāo)試劑

3 酶標(biāo)包被板

4 樣品稀釋液

5 顯色劑 A 液

6 顯色劑 B 液

標(biāo)本要求

20ml×1 瓶

6ml×1 瓶

12 孔×8 條

6ml×1 瓶

6ml×1 瓶

6ml×1/瓶

7 終止液

8 陽(yáng)性對(duì)照

9 陰性對(duì)照

10 說(shuō)明書

11 封板膜

12 密封袋

6ml×1 瓶

0.5ml×1 瓶

0.5ml×1 瓶

1 份

2 張

1 個(gè)

1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能

馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于 ℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1. 編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1

孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)

2. 加樣:分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50#l。然后在待測(cè)樣品孔先

加樣品稀釋液 40#l,然后再加待測(cè)樣品 10#l。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不

觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,

3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

重復(fù) 5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50#l,空白孔除外。

7. 溫育:操作同 3。

8. 洗滌:操作同 5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50#l,再加入顯色劑 B50#l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液 50#l,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止

液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

操作程序總結(jié):

計(jì)算和結(jié)果判定:

試驗(yàn)有效性:陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00;  陰性對(duì)照平均值≤0.10

臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

陰性判定:樣品 OD 值<  臨界值(CUT OFF)者為流行性腦脊髓膜炎抗體(MM Ab)陰性

陽(yáng)性判定:樣品 OD 值≥  臨界值(CUT OFF)者為流行性腦脊髓膜炎抗體(MM Ab)陽(yáng)性

注意事項(xiàng)

1.操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未

用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物請(qǐng)避光保存。

6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),參考波長(zhǎng)為 630nm

7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸,使用時(shí)必須

注意安全。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2℃。

2.有效期:6 個(gè)月

上海一研生物科技有限公司作者

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