糖原系列_糖原合成酶(GCS)測(cè)試盒_微量法
測(cè)定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
注 意 ：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
GCS（EC 2.4.1.11）催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UTP，以α-1，4-糖苷鍵相連延長(zhǎng)糖鏈，是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶，是胰島素作用的主要靶酶，對(duì)糖代謝的調(diào)節(jié)和血糖穩(wěn)態(tài)的維持具有重要作用。
測(cè)定原理：
GCS催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UDP，丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下測(cè)定NADH下降速率，即可反映GCS活性。
需自備的儀器和用品：
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
糖原系列_糖原合成酶(GCS)測(cè)試盒_微量法
試劑的組成和配制：
提取液：100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體18 mL×1瓶， 4℃保存；
試劑二：液體2.5mL×1瓶，4℃保存；
試劑三：液體16.4uL×1支，4℃保存；
試劑四：粉劑×1支， -20℃保存；
試劑五：粉劑×1支， -20℃保存；
樣本的前處理：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、工作液的配制：臨用前將試劑三和試劑四轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
3、試劑五的配制：臨用前在試劑五中加入1mL試劑二充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
4、將工作液和試劑五置于37℃預(yù)熱5分鐘。
5、在1mL微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、10μL試劑五和180μL工作液，立即混勻，記錄340nm處初始吸光值A(chǔ)1和1min后的吸光值A(chǔ)2，計(jì)算ΔA=A1-A2。
注意：在該試劑盒中，若ΔA大于0.1，需將樣本用提取液稀釋適當(dāng)倍數(shù)后測(cè)定，使ΔA小于0.1可提高檢測(cè)靈敏度。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
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