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南京億迅生物科技有限公司
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游離脂肪酸（FFA）含量測(cè)定試劑盒
2019-11-19 閱讀(368)
| 提 供 商 | 南京億迅生物科技有限公司 | 資料大小 | 31.5KB |
|---|---|---|---|
| 資料圖片 | 下載次數(shù) | 46次 | |
| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 368次 |
測(cè)定意義：
FFA既是脂肪水解的產(chǎn)物，又是脂肪合成的底物。血清中FFA的濃度與脂類代謝、糖代謝、內(nèi)分泌功能有關(guān)。
測(cè)定原理：
FFA與銅離子結(jié)合形成脂肪酸銅鹽，并溶于氯坊；利用銅試劑法測(cè)定銅離子含量，即可推算出游離脂肪酸含量。
自備儀器和用品：
研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、一個(gè)25 mL玻璃瓶、兩個(gè)10 mL玻璃瓶、正庚烷、無水甲醇、氯坊（三氯鉀烷）、無水乙醇和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，室溫保存。
試劑二：自備。實(shí)驗(yàn)前1 d，加入4.8 mL正庚烷，0.2 mL無水甲醇，5 mL氯坊（自備），蓋緊后混勻，室溫保存。
試劑三：液體×1瓶，室溫保存。
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前在試劑瓶中加入4 mL無水乙醇，充分溶解。
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1瓶，室溫保存。臨用前加入7.8 mL氯坊充分溶解，即為500μmol/L的棕櫚酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。
樣品中FFA提?。?/span>
1、血液中FFA測(cè)定：將所取血液，室溫靜置1 h 后，于4 ℃ 離心機(jī)3 500 rpm離心15min，取上層血清置于-20℃冰箱保存，待測(cè)
2、組織中FFA含量測(cè)定：組織用生理鹽水沖洗干凈后，用吸水紙吸取表面水分，稱取約0.1g，加入1 mL試劑一，勻漿后，8000rpm，4℃離心10min，取上清液，稀釋5倍，待測(cè)。
測(cè)定：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長到550 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 空白管：取0.5mL EP管，加入10μL蒸餾水，100μL試劑二，40μL試劑三，40μL試劑四，蓋緊后充分震蕩混勻（2min），倒入微量石英比色皿/96孔板，靜置15min，于550nm光吸收，記為A空白管。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取0.5mL EP管，加入10μL標(biāo)準(zhǔn)液，100μL試劑二，40μL試劑三，40μL試劑四，蓋緊后充分震蕩混勻（2min），倒入微量石英比色皿/96孔板，靜置15min，于550nm光吸收，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
4. 測(cè)定管：取0.5mL EP管，加入10μL上清液，100μL試劑二，40μL試劑三，40μL試劑四，蓋緊后充分震蕩混勻（2min），倒入微量石英比色皿/96孔板，靜置15min，于550nm光吸收，記為A測(cè)定管。
FFA含量計(jì)算：
a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、血液FFA含量
FFA含量（μ mol/L）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)] 1 L×5
=2500×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)
2、組織FFA含量
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算
FFA含量（μ mol/g 鮮重）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×V樣總÷Cpr ×5=2.5×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
FFA含量（μ mol/g 鮮重）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×V樣總÷W×5=2.5×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ÷W
C標(biāo)準(zhǔn)液：500μmol/L；1 L：指每升樣品；V樣總：上清液總體積，1 mL=0.001L；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g。
b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、血液FFA含量
FFA含量（μ mol/L）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×1 L×5=2500×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)
2、組織FFA含量
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算
FFA含量（μ mol/g 鮮重）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×V樣總÷Cpr×5 =2.5×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
FFA含量（μ mol/g 鮮重）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×V樣總÷W×5=2.5×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ÷W
C標(biāo)準(zhǔn)液：500μmol/L；1 L：指每升樣品；V樣總：上清液總體積，1 mL=0.001L；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g。
注意事項(xiàng)：
1. 試劑四配制應(yīng)盡量晚配，可在操作到加入試劑三時(shí)，再配制試劑四。
2. 該試劑盒不可用塑料比色皿和96孔板測(cè)定，需用玻璃比色皿。
